Игорь Геннадьевич Синельников, Валерий Юрьевич Кислицин, Андрей Михайлович Чулкин, Андрей Алексеевич Шаплин, Александра Михайловна Рожкова

Влияние нокаута гена ku70 на частоту трансформации мицелиального гриба Penicillium Verruculosum

Аннотация. Для увеличения частоты гомологичной рекомбинации (HR) при трансформации промышленного штамма Penicillium verruculosum 221-151 (ВКМ F-3972D) методом CRISPR/CAS9 был нокаутирован ген ku70, который кодирует белок Ku70, связывающийся в местах двуцепочечных разрывов ДНК и участвующий в процессе репарации по механизму негомологичного соединении концов. Предположительно, новый реципиентный штамм P. verruculosum ΔniaDΔku70 должен иметь повышенную частоту гомологичной рекомбинации при трансформации в сравнении с реципиентным штаммом P. verruculosum ΔniaD за счет интегративной встройки экспрессионной кассеты только по механизму HR. В качестве маркерного был выбран ген pep1, кодирующий собственную аспартат-протеазу. Однако было показано, что нокаут гена ku70 привел к существенному снижению частоты ко-трансформации в штамме P. verruculosum ΔniaDΔku70 в сравнении с штаммом P. verruculosum ΔniaD при одинаковой нагрузке вносимой ДНК (3 мкг). При этом число копий гена pep1 в рекомбинантных штаммах серии P. verruculosum Pep1 (с нативным Ku70) составляло от 3 до 28, что свидетельствовало о преобладании механизма негомологичной рекомбинации (NHEJ).
Ключевые слова: СRISPR/CAS9, ku70, гомологичная рекомбинация
DOI: 10.55959/MSU0579-9384-2-2023-64-4-460-467

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2023, том 64, № 5, стр. 460-467