А.Ю. Христиченко, Д.М. Хушпульян, Н.А. Смирнова, А.А. Захарянц, Т.А. Чубарь, В.И. Тишков, И.Г. Газарян, А.А. Полозников

Оптимизация репортера Neh2-Luc для скрининга активаторов антиоксидантной программы

Получены репортерные конструкции, экспрессирующие слитые белки из фрагментов 16–96 и 16–85 а.о. Neh2-домена транскрипционного фактора Nrf2 и люциферазы светляков. Получены линии HeLa, стабильно экспрессирующие эти репортерные конструкции и ранее разработанную авторами конструкцию Neh2-luc. Проведен сравнительный анализ действия репортерных линий с помощью известного активатора Nrf2 (нордигидрогваяретовой кислоты). Показано, что репортер, экспрессирующий слитый с люциферазой минимальный фрагмент Neh2-домена, содержащий 16–85 а.о., обладает в два раза более высокой амплитудой отклика, чем репортер Neh2-luc, и может быть рекомендован для высокопродуктивного скрининга активаторов Nrf2. Улучшенный отклик этого репортера может быть обусловлен убиквитинированием N-концевых лизинов (7, 10, 11) белка люциферазы, находящихся вблизи убиквитинируемой последовательности Neh2.
Ключевые слова: Nrf2, Keap1, люцифераза, транскрипционный фактор, слитый белок, клеточный репортер, нордигидрогваяретовая кислота.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2020, том 61, № 3, стр. 214-222