Н.В. Комарова, С.И. Глухов, М.С. Андрианова, А.Е. Кузнецов
Использование флуоресцентных
меток Cу3 и Cу5 для защиты цепи
ДНК от деградации под воздействием λ-экзонуклеазы
Реферат
Экзонуклеаза фага λ
расщепляет 5′-фосфорилированную цепь двухцепочечной ДНК в направлении 5′–3′.
В данной работе впервые изучена активность фермента по отношению к
ДНК-субстратам, содержащим на 5′-концах флуоресцентные метки Cy3 и Cy5. С
использованием методики флуоресцентного измерения активности экзонуклеазы
показано, что двухцепочечная ДНК, оба 5′-конца которой содержат данные
флуорофоры, не разрушается под действием экзонуклеазы фага λ. С помощью
электрофоретического разделения ДНК в полиакриламидном геле изучен процесс
получения одноцепочечной ДНК из двухцепочечных предшественников, содержащих
различные метки на 5′-концах. Показано, что введение флуорофоров Cy3 и
Cy5 на 5′-конец цепи ДНК защищает эту цепь от повреждения ферментом как в
дуплексе, так и в одноцепочечной форме, и эти метки могут быть использованы для
получения флуоресцентно-меченной одноцепочечной ДНК.
Ключевые слова: экзонуклеаза фага
λ, флуоресцентная метка, получение одноцепочечной
ДНК.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2018, том 59, № 2, стр. 92-100
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2018
|