Мария Константиновна Кошкина, Егор Павлович Сергеев, Тимофей Алексеевич Федоров, Михаил Дмитриевич Шеломов, Анастасия Александровна Пометун, Святослав Сергеевич Савин, Владимир Иванович Тишков, Денис Леонидович Атрошенко

Кинетика термоинактивации оксидазы D-аминокислот OpaDAAO1 из дрожжей Ogataea parapolymorpha DL-1

Аннотация. Проведенная нами ранее аннотация генома дрожжей Ogataea parapolymorpha DL-1 позволила идентифицировать в нем пять генов потенциальных оксидаз D-аминокислот. Все гены opadaao1 – opadaao5 были клонированы и экспрессированы в E. coli. Четыре фермента OpaDAAO1 – OpaDAAO4 получены в высокоочищенном виде, изучены их каталитические свойства. Установлено, что среди всех описанных в литературе на данный момент DAAO фермент OpaDAAO1 с D-Ala имеет наибольшую каталитическую константу k_cat, что делает его перспективным для практического применения. Однако для эффективного применения фермента на практике кроме хороших каталитических параметров требуется высокая стабильность и знание механизма инактивации, в том числе и при повышенной температуре. В настоящей работе изучено влияние повышенной температуры на стабильность OpaDAAO1. Показано, что фермент имеет высокую для оксидаз D-аминокислот термостабильность. Изучена кинетика инактивации OpaDAAO1 при разных значениях температуры, начальной концентрации фермента, и при добавлении экзогенного FAD. На основании полученных данных предложена возможная кинетическая схема инактивации.
Ключевые слова: температурная стабильность, кинетика термоинактивации, оксидаза D-аминокислот, Ogataea parapolymorpha DL-1
DOI: 10.55959/MSU0579-9384-2-2023-64-2-152-162

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2023, том 64, № 2, стр. 152-162