Д.Л. Атрошенко, А.А. Пометун, С.С. Савин, В.И. Тишков
Определение кинетических параметров оксидазы D-аминокислот дрожжей дикого типа и ее мутантов в реакции
окисления цефалоспорина С
Реферат
Окисление цефалоспорина С (CPC)
оксидазой D-аминокислот является первой стадией
промышленного процесса биокаталитического производства 7-аминоцефалоспорановой
кислоты – исходного синтона получения полусинтетических цефалоспориновых
антибиотиков. Нами проведено определение кинетических параметров
(каталитической константы и константы Михаэлиса) на основании зависимости
начальной скорости реакции от концентрации СРС (метод начальных скоростей) для
рекомбинантной оксидазы дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) дикого типа и ее трех мутантных форм с точечными
заменами остатка Met на остаток Leu
в положениях 104, 156 и 209, а также четверного мутанта TvDAAORDAF. Показано, что у точечных
мутантов введенные замены в первую очередь приводят к уменьшению константы
Михаэлиса. Наибольшее увеличение каталитической эффективности kкат/KM (39%) наблюдалось для мутанта с заменой Met156Leu. В случае четверного
мутанта константа Михаэлиса у фермента с СРС возросла в четыре раза по
сравнению с ферментом дикого типа, а каталитическая эффективность практически
не изменилась за счет четырехкратного увеличения каталитической константы.
Ключевые слова: Оксидаза D-аминокислот,
Trigonopsis variabilis, рекомбинантный фермент, мутантные формы,
окисление цефалоспорина С, кинетические параметры.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2019, том 60, № 4, стр. 226-231
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2019
|