Д.Л. Атрошенко, С.А. Зарубина, М.Д. Шеломов, И.В. Голубев, С.С. Савин, В.И. Тишков
Получение и
характеристика многоточечных мутантов оксидазы D-аминокислот
с улучшенными стабильностью и активностью
Реферат
Оксидаза D-аминокислот (DAAO) – FAD-содержащая
оксидоредуктаза, способная стереоспецифично окислять D-аминокислоты с
образованием α-кетокислот, иона аммония и пероксида водорода. Наиболее
важным биотехнологическим процессом с использованием DAAO
является получение 7‑аминоцефалоспорановой кислоты (7-АЦК) из
цефалоспорина С. Из 7-АЦК затем получают цефалоспориновые антибиотики
различных поколений. Ранее нами были получены мутантные DAAO
из дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) с точечными аминокислотными заменами, обладающие повышенной
термостабильностью или улучшенными каталитическими свойствами в реакции
окисления цефалоспорина С. В данной работе получены две новые мутантные
TvDAAO с заменой двух и четырех аминокислотных остатков. Каталитические
константы для этих мутантных TvDAAO в реакции окисления цефалоспорина С
в 1,8 и 4 раза выше, чем соответствующее значение для фермента дикого типа.
Объединение замен привело к увеличению температурной стабильности в 2–3 раза
для обеих мутантных форм.
Ключевые слова: оксидаза D-аминокислот, цефалоспорин С,
направленный мутагенез, рациональный дизайн, кинетические свойства,
стабильность.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2017, том 58, № 5, стр. 230-236
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2017
|