А.А. Полозников, Г.С. Захарова, Т.А. Чубарь, Д.М. Хушпульян, И.Г. Газарян, В.И. Тишков
Каталитические свойства и
стабильность рекомбинантной пероксидазы табака с заменой Ile37Met
Реферат
Методом
направленного мутагенеза получена мутантная пероксидаза табака (ТОР) с заменой Ile37Met. Данная мутация имитирует пероксидазу сои, в которой
остаток Met37 отвечает за повышенную стабильность.
Мутантная ТОР Ile37Met экспрессировалась в клетках E. coli BL21(DE3)
CodonPlus в виде нерастворимых телец включения. Уровень экспрессии составил
более 40% от общего белка клетки. Активный фермент получали с помощью
рефолдинга по методике, разработанной для рекомбинантной пероксидазы табака
дикого типа. Были исследованы субстратная специфичность, каталитическая
активность и термостабильность мутантной ТОР Ile37Met. Показано, что
введение данной мутации приводит не к увеличению стабильности фермента, а к
снижению его каталитических свойств.
Ключевые слова: пероксидаза
табака, мутагенез, рефолдинг, термостабильность.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2014, том 55, № 2, стр. 106-112
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2014
|