Д.А. Гудков, Е.Н. Ефременко

Рефолдинг гексагистидинсодержащей органофосфатгидролазы из телец включения

Из клеток E. coli DH 5a выделены и очищены тельца включения, содержащие органофосфатгидролазу, с гексагистидиновой последовательностью на N-конце молекулы белка. При исследовании процесса солюбилизации телец включения были установлены оптимальные условия его проведения: 6 М мочевины в фосфатно-солевом буфере с pH 7,6; 37°С; 2 ч. Проведен рефолдинг фермента из растворов солюбилизированных телец включения с использованием металл-хелатирующей хроматографии. Изучен процесс активации фермента после проведения рефолдинга. Показано, что максимум активности фермента может быть достигнут после 24 ч его инкубирования при 4°С в среде с 0,05 М CO₃^2––ионов в присутствии ионов Co²⁺ (10^–5 М).

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2007, том 48, № 6, стр. 389-394