Д.А. Алтухов, Ю.К. Агапова, А.В. Власкина, Д.А. Корженевский,А.Ю. Николаева, А.М. Франк-Каменецкая, Э.В. Бочаров, Т.В. Ракитина

Получение рекомбинантных HU-белков из S. Melliferum и M. Gallisepticum и их комплексов с дцДНК для структурных ЯМР-исследований

Cоздана высокоэффективная система бактериальной экспрессии и протокол очистки рекомбинантных HU-белков, меченных изотопами ¹³C и ¹⁵N, из микоплазм S. Melliferum (HUSpm) и M. gallisepticum (HUMgal), пригодных для структурных исследований с помощью ЯМР-спектроскопии высокого разрешения, а также подобраны условия проведения ЯМР-экспериментов и получены обзорные двумерные гетероядерные ЯМР-спектры ¹H/¹⁵N-HSQC и ¹H/¹³С-HSQC-CT свободных форм HU-белков (HUSpm и HUMGal), а также спектр ¹H/¹⁵N-HSQC HUSpm в присутствии ДНК-дуплекса. Разработанные методики универсальны, применимы для других представителей семейства HU-белков, позволяют проводить структурно-динамические исследования белков в свободной форме и изучение их конформационных перестроек при образовании комплексов с различными видами ДНК-дуплексов или ингибиторами ДНК-связывания.
Ключевые слова: ДНК-связывание, гистоноподобные HU-белки, бактериальная система экспрессии, ЯМР-спектроскопия.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2016, том 57, № 4, стр. 227-234