ChemNet
 
Вестник Московского Университета, серия "Химия"
Предыдущая статья Следующая статья Содержание  

А.А. Алексеева, А.С. Петров, В.В. Федорчук, Е.А. Федорчук, Т.А. Осипова, В.И. Тишков

Изменение величины изоэлектрической точки формиатдегидрогеназы методом рационального дизайна

Реферат

Для расширения рН-оптимума стабильности NAD+-зависимой формиатдегидрогеназы (ФДГ, КФ 1.2.1.2) из бактерии Pseudomonas sp. 101 (PseФДГ) методом направленного мутагенеза получены четыре мутантных фермента с заменами Lys112Pro, Lys231Ala, Lys231Ser и Lys317Asn. Выбор положений и типа аминокислоты для замены был сделан на основе выравнивания аминокислотных последовательностей ФДГ из разных источников, а также анализа трехмерной структуры PseФДГ. Для всех полученных мутантных форм проведено изучение кинетических свойств и температурной стабильности. Показано, что замены в положениях 112 и 231 приводят к небольшому улучшению кинетических свойств, в то время как для мутанта Lys317Asn наблюдалось снижение сродства к коферменту. Изучение температурной стабильности полученных ферментов показало, что замены в положениях 112 и 231 приводят лишь к небольшой дестабилизации фермента, а замена Lys317Asn вызывает значительную потерю в термостабильности. Для всех полученных мутантных форм наблюдалось снижение изоэлектрической точки примерно на 0,1 единицу.
Ключевые слова: формиатдегидрогеназа, Pseudomonas sp.101, белковая инженерия, рациональный дизайн, изоэлектрическая точка.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2014, том 55, № 2, стр. 98-105


Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2014



Сервер создается при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований
Не разрешается  копирование материалов и размещение на других Web-сайтах
Вебдизайн: Copyright (C) И. Миняйлова и В. Миняйлов
Copyright (C) Химический факультет МГУ
Написать письмо редактору