В.Голубев, Н.В.Комарова, О.Е. Скиргелло, Т.А. Осипова, В.И. Тишков

Оптимизация методики определения каталитических параметров оксидазы D-аминокислот в реакции окисления цефалоспорина с с помощью ВЭЖХ

Половину общего количества цефалоспориновых антибиотиков разных поколений производят из 7-аминоцефалоспорановой кислоты, которую до недавнего времени получали с помощью органического синтеза. На смену органическому синтезу постепенно приходит двустадийный биокаталитический процесс, на первой стадии которого происходит ферментативное окисление природного антибиотика цефалоспорина С под действием оксидазы D-аминокислот (DAAO). Стандартная методика определения активности DAAO основана на определении концентрации выделяющегося пероксида с помощью сопряженной реакции с пероксидазой из корней хрена. Поскольку в процессе окисления цефалоспорина С пероксид водорода вступает в неферментативную реакцию с промежуточным продуктом, то для определения активности фермента наиболее корректно следить за убылью субстрата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В данной работе мы провели оптимизацию методики определения концентрации цефалоспорина С с помощью ВЭЖХ в реакционной смеси в процессе его окисления оксидазой D-аминокислот. Используя разработанную методику, мы определили каталитические параметры для DAAO из дрожжей Trigonopsis variabilis дикого типа и одной из ее мутантных форм в реакции окисления цефалоспорина C.
Ключевые слова: оксидаза D-аминокислот, Trigonopsis variabilis, цефалоспорин С, каталитические параметры, высокоэффективная жидкостная хроматография.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2014, том 55, № 2, стр. 93-97