Д.В. Смирнова, М.И. Кокшаров, И.Н. Зоров, Н.Н. Угарова

Гибридные белки люцифераза-стрептавидин. получение, свойства

Cконструированы плазмиды, кодирующие гены гибридных белков термостабильного мутанта (TS) люциферазы cветляков Luciola mingrelica (Luc) cо стрептавидином (SA) и полигистидиновой последовательностью (His₆) на N- или С-конце белка: SA-Luc-His₆, His₆-SA-Luc, Luc-SA-His₆. Гибридные белки наработаны, очищены, изучены их состав, люциферазная активность, термостабильность, спектры биолюминесценции и способность связывать биотин. Введение стрептавидина не влияет на спектры биолюминесценции, но при 47^оС уменьшает термостабильность вдвое. Методом эксклюзионной хроматографии показано, что в зависимости от структуры плазмиды гибридные белки экспрессируются в виде димеров, тетрамеров и более высокомолекулярных олигомеров, которые отличаются по люциферазной активности и способности связывать биотин. Наиболее оптимальными свойствами обладает гибридный белок His₆-SA-Luc.
Ключевые слова: люцифераза светляков, Luciola mingrelica, гибридный белок, стрептавидин, олигомерные формы.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2014, том 55, № 2, стр. 79-85