Н.Н. Угарова
Стабилизация
люциферазы светляков Luciola mingrelica методами генетической инженерии
Реферат
Дан
краткий обзор результатов по стабилизации люциферазы светляков Luciola
mingrelica методами генетической инженерии. Методом сайт-специфического
мутагенеза Cys62,146,164Ser получены мутантные ферменты с повышенной
термостабильностью и меньшей зависимостью от добавок дитиотреитола. Получен
двойной мутант G216N, A217L, термостабильность и устойчивость к ДМСО которого
были в несколько раз выше, чем WT-люциферазы. Случайный мутагенез участка гена,
кодирующего остатки 1-225, и скрининг мутантов позволили получить более
термостабильный, чем WT-люцифераза, мутант МТ8 и более устойчивые к
диметилсульфоксиду мутанты MT3, MT4. Методом направленной эволюции участка
гена, кодирующего остатки 130-390, после 4 циклов мутагенеза получен мутант
4TS, содержащий 8 замен, удельная активность которого по сравнению с
WT-люциферазой возросла в 2 раза, значение Km по АТФ
уменьшилось в 8 раз, а стабильность при 42°C увеличилась в 65 раз. Обсужденмеханизмстабилизацииданногомутанта.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2010, том 51, № 3, стр. 168-173
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2010
|