Одинцева Е.Р., Попова А.С., Рожкова А.М., Тишков В.И.

Роль остатков цистеина в стабильности бактериальной формиатдегидрогеназы

NAD⁺-зависимая формиатдегидрогеназа (ФДГ; КФ1.2.1.2) из метилотрофных бактерий Pseudomonas sp.101 (PseФДГ) обладает наиболее высокой термостабильностью среди всех известных формиатдегидрогеназ, выделенных из различных источников. Инактивация PseФДГ при температуре ниже 45° связана с окислением SH-групп фермента. Ранее проведенные эксперименты по химической модификации SH-групп ФДГ показали наличие двух остатков Cys, влияющих на каталитическую активность ФДГ. Анализ трехмерной структуры фермента свидетельствует о том, что остатки Cys255 и Cys354 расположены на поверхности белковой глобулы. Ранее было показано, что мутации Cys255Ser и Cys255Met приводят к повышению химической стабильности ФДГ более, чем в 100 раз, однако при этом термостабильность снижается в 3 и 10 раз соответственно, и ухудшается сродство к NAD⁺. Полученный нами мутант ФДГ Cys255Ala обладал такой же химической стабильностью, что и мутант Cys255Ser с сохранением кинетических параметров нативной ФДГ. Ухудшение его термостабильности было компенсировано введением дополнительных мутаций, повышающих стабильность ФДГ при температурах выше 50°. В работе были также получены мутанты ФДГ Cys354Ala, Cys354Ser, Cys354Met и изучены их свойства.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2002, том 43, № 6, стр. 356-359